液氮罐的使用與保管
  一、使用前的檢查
液氮罐在充填液氮之前，首先要檢查外殼有無(wú)凹陷，真空排氣口是否完好。若被碰壞，真空度則會(huì)降低，嚴(yán)重時(shí)進(jìn)氣不能保溫，這樣罐上部會(huì)結(jié)霜，液氮損耗大，失去繼續(xù)使用的價(jià)值。其次，檢查罐的內(nèi)部，若有異物，必須取出，以防內(nèi)膽被腐蝕。
    二、液氮的充填
    填充液氮時(shí)要小心謹(jǐn)慎。對(duì)于新罐或處于干燥狀態(tài)的罐一定要緩慢填充并進(jìn)行預(yù)冷，以防降溫太快損壞內(nèi)膽，減少使用年限。充填液氮時(shí)不要將液氮倒在真空排氣口上，以免造成真空度下降。蓋塞是用絕熱材料制造的，既能防止液氮蒸發(fā)，也能起到固定提筒的作用，所以開(kāi)關(guān)時(shí)要盡量減少磨損，以延長(zhǎng)使用壽命。
    三、使用過(guò)程中的檢查
    使用過(guò)程中要經(jīng)常檢查。可以用眼觀測(cè)也可以用手觸摸外殼，若發(fā)現(xiàn)外表掛霜，應(yīng)停止使用；特別是頸管內(nèi)壁附霜結(jié)冰時(shí)不宜用小刀去刮，以防頸管內(nèi)壁受到破壞，造成真空不良，而是應(yīng)將液氮取出，讓其自然融化。
    四、液氮罐的放置
    液氮罐要存放在通風(fēng)良好的陰涼處，不要在太陽(yáng)光下直曬。由于其制造精密及其固有特性，無(wú)論在使用或存放時(shí)，液氮罐均不準(zhǔn)傾斜、橫放、倒置、堆壓、相互撞擊或與其他物件碰撞，要做到輕拿輕放并始終保持直立。
    五、液氮罐的清洗
    液氮罐閑置不用時(shí)，要用清水沖洗干凈，將水排凈，用鼓風(fēng)機(jī)吹干，常溫下放置待用。液氮罐內(nèi)的液氮揮發(fā)完后，所剩遺漏物質(zhì)(如冷凍精子)很快融化，變成液態(tài)物質(zhì)而附在內(nèi)膽上，會(huì)對(duì)鋁合金的內(nèi)膽造成腐蝕，若形成空洞，液氮罐就會(huì)報(bào)廢，因此液氮罐內(nèi)液氮耗盡后對(duì)罐子進(jìn)行刷洗是十分必要的。具體的刷洗辦法如下：首先把液氮罐內(nèi)提筒取出，液氮移出，放置2—3天，待罐內(nèi)溫度上升到0℃左右，再倒人30℃左右的溫水，用布擦洗。若發(fā)現(xiàn)個(gè)別融化物質(zhì)粘在內(nèi)膽底上，一定要細(xì)心洗刷干凈。然后再用清水沖洗數(shù)次，之后倒置液氮罐，放在室內(nèi)安全不宜翻倒處，自然風(fēng)干，或如前所述用鼓風(fēng)機(jī)風(fēng)干。注意在整個(gè)刷洗過(guò)程中，動(dòng)作要輕慢，倒人水的溫度不可超過(guò)40℃，總重不要超過(guò)2kg為宜。
    六、液氮罐的安全運(yùn)輸
液氮罐在運(yùn)輸過(guò)程中必須裝在木架內(nèi)墊好軟墊，并固定好。罐與罐之間要用填充物隔開(kāi)，防止顛簸撞擊，嚴(yán)防傾倒。裝卸車時(shí)要嚴(yán)防液氮罐碰擊，更不能在地上隨意拖拉，以免減少液氮罐的使用壽命。
液氮罐是高度真空的冷藏器。在使用和保養(yǎng)液氮罐時(shí)必須掌握以下幾點(diǎn)：
1、 液氮罐在使用前，應(yīng)先注入少量液氮使之預(yù)冷，在罐內(nèi)溫度達(dá)到液氮溫度時(shí)，充入液氮直至滿罐。液氮罐要輕拿輕放，防止碰撞擠壓，移動(dòng)時(shí)不可在地面拖拉，要抬起來(lái)。平時(shí)要存放在干燥、通風(fēng)良好的房間，防止潮濕。
2、 在保存冷凍精液時(shí)，罐內(nèi)要經(jīng)常保持一定容量的液氮，以凍精完全浸泡在液氮中為宜。液氮量的測(cè)量有兩種方法：
2.1 木尺測(cè)量法
　　取一根直徑5cm、長(zhǎng)80cm的木棍，去皮后涂上黑色，然后自一端開(kāi)始每隔5cm設(shè)一刻度，測(cè)量時(shí)，將零刻度朝下，自液氮罐口插到罐底，經(jīng)5～10S取出，結(jié)霜的長(zhǎng)度即為罐內(nèi)液氮容量，如罐內(nèi)液氮容量不足總?cè)萘康?/3時(shí)，應(yīng)補(bǔ)充液氮。
2.2 測(cè)重法
　　先稱出空罐的重量，再稱出注滿液氮時(shí)的重量，然后減去空罐的重量，即得罐內(nèi)液氮的總重量，以后每隔3～5d稱一次液氮罐的重量，當(dāng)罐內(nèi)液氮的重量低于液氮總重量的1/3時(shí)，即應(yīng)充氮。
3、 要隨時(shí)檢查頸塞和頸塞小溝，及時(shí)除掉頸塞上的結(jié)冰，頸塞上不能放置塑料布等物質(zhì)，增加封閉性，保證液氮罐的使用性能。當(dāng)發(fā)現(xiàn)液氮消耗速度過(guò)快或在液氮罐頸口的周圍附有水珠、出現(xiàn)白霜時(shí)，即表示罐的絕緣性能失調(diào)，不能保存液氮。
4、 液氮罐內(nèi)放置標(biāo)本要做好標(biāo)記，取放時(shí)要穩(wěn)、準(zhǔn)、快。
5、 液氮罐的內(nèi)腔每年要清洗一次，以防腐蝕罐壁，清洗前要將罐內(nèi)的液氮放干，并在室內(nèi)停放2～3d預(yù)熱到室溫后，用中性洗衣粉刷洗，再用清水沖洗干凈控干，清洗液和清水的溫度不宜超過(guò)40℃，防止過(guò)熱影響罐的性能。
6、 液氮罐要盡量減少運(yùn)輸和開(kāi)蓋的次數(shù)。如需運(yùn)輸，一定要用繩索固定在車箱上，保持直立，嚴(yán)防摔撞、倒覆、橫臥，盡量防止劇烈震動(dòng)。
液氮的安全使用
液氮（Liquid nitrogen）是一種特殊的產(chǎn)業(yè)制成品，廣泛應(yīng)用于精密儀表制造和醫(yī)藥、食品等工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、日常生活，主要是冷凍貯存媒介。液氮來(lái)源于空氣，空氣中所含主要?dú)怏w成分為氧氣和氮?dú)?，其中，氮?dú)饧s占空氣的78．09％。液氮即為液化的氮?dú)狻?
　　1、液氮特性：液氮由于是由氮?dú)鈮嚎s冷卻的液體，其理化性質(zhì)比較特殊。主要特性如下：
　?、俪蜏匦裕阂旱姆悬c(diǎn)為－195．8，液氮?dú)饣瘯r(shí)每公斤可吸熱48大卡。
　　②液氮是無(wú)色、無(wú)臭、無(wú)毒的液體。
　　 ③液氮的滲透性很弱，但當(dāng)人體皮膚接觸液氮時(shí)會(huì)受到嚴(yán)重凍傷。
　　 ④膨脹性：液氮是由空氣壓縮冷卻制成，其氣化時(shí)能恢復(fù)為氮?dú)?。?jù)測(cè)每一立升液氮?dú)饣?，溫度上?5℃，體積膨脹約為180倍。
　?、葜舷⑿裕旱?dú)獗旧聿荒苤率谷酥舷?，但在一定空間內(nèi)，假如氮?dú)膺^(guò)多而隔盡氧氣，操縱者也會(huì)引起窒息。據(jù)測(cè)定，10公斤液氮在10立方米的室內(nèi)瞬間蒸發(fā)，可使空間氧氣忽然降到13％，造成空間缺氧。在此條件下，就能引起人的窒息乃至死亡。
　　2、液氮貯存：液氮貯存種類一般可分為貯存罐、運(yùn)輸罐兩種。貯存罐主要用于室內(nèi)液氮的靜置貯存，不宜在工作狀態(tài)下作遠(yuǎn)間隔運(yùn)輸使用；為了滿足運(yùn)輸條件，運(yùn)輸罐主要有專項(xiàng)防震設(shè)計(jì)，除靜置貯存外，還可在充裝液氮狀態(tài)下，作運(yùn)輸使用，但應(yīng)避免劇烈的碰撞和震動(dòng)；另外，在短時(shí)間、短間隔內(nèi)使用少量液氮時(shí)，也可以臨時(shí)使用保溫瓶（杯）等用具存放，但在用保溫瓶（杯）等物貯存時(shí)，必須在瓶塞邊沿切開(kāi)一條牙簽樣大小的小溝，以便氮?dú)獾陌踩懦觥?
3、液氮的安全使用：正常情況下，液氮貯存在密封式罐體時(shí)，要留意將液氮罐口保存一定縫隙，否則液氮?dú)饣瘯r(shí)氣體無(wú)法及時(shí)排出，極易造成爆炸事故。一般液氮罐的蓋塞都留有一定的縫隙，在使用時(shí)千萬(wàn)不要人為將其堵塞。
　 ⑴液氮使用留意事項(xiàng)： ①液氮是低溫制品，在使用過(guò)程中要防止凍傷。 ②在液氮中操縱及存取冷凍物品時(shí)速度要快，留意輕拿輕放，以免物品解凍，造成不必要的損失。 ③在使用和貯存液氮的房間內(nèi)，要保持透風(fēng)良好，以避免空間缺氧，造成職員窒息。 ④由于液氮不具有殺菌性，故接觸液氮的用具要留意消毒。 ⑤液氮罐在運(yùn)輸過(guò)程中一定要固定好，以防震動(dòng)和倒翻。 ⑥液氮罐長(zhǎng)期貯存物品時(shí)，要留意及時(shí)補(bǔ)充液氮。
　?、迫萜鞯氖褂镁S護(hù): ①在使用過(guò)程中，天天都應(yīng)隨時(shí)檢查罐體的使用情況，發(fā)現(xiàn)罐體瓶蓋上或上部有水珠和結(jié)霜情況，說(shuō)明罐體質(zhì)量有題目，應(yīng)立即停止使用；在罐體無(wú)水珠或結(jié)霜現(xiàn)象時(shí)，可以用手觸摸外殼 ，若感覺(jué)上部冷，下部熱，這也說(shuō)明罐體質(zhì)量有一定的題目，即液氮日增損較大，應(yīng)留意觀察，防止液氮耗損，最好停止使用；同時(shí)在日常使用過(guò)程中，還要參照相關(guān)壓力容器安全技術(shù)監(jiān)察規(guī)程要求，定期對(duì)液氮罐及安全設(shè)施儀表附件進(jìn)行檢測(cè)校驗(yàn)，確保其安全完好。 ②使用前要認(rèn)真檢查容器相關(guān)安全儀表和附件，當(dāng)儀表、附件處于完好的正常狀態(tài)下，才能正確把握和調(diào)整其所需壓力和容量； 若發(fā)現(xiàn)外表掛霜，應(yīng)立即停止使用，及時(shí)檢驗(yàn)檢測(cè)和維修。 ③液氮罐在充填液氮之前，首先要檢查外殼有無(wú)凹陷，真空排氣口是否完好；若被碰壞，真空度則會(huì)降低，嚴(yán)重時(shí)進(jìn)氣不能保溫，這樣罐體上部就會(huì)結(jié)霜，液氮損耗大，會(huì)失往繼續(xù)使用的價(jià)值；充填液氮時(shí)更不能將液氮倒在真空排氣口，以免造成真空度下降；同時(shí)，充填液氮前罐內(nèi)要有少量液氮保持預(yù)冷狀態(tài)。 ④液氮罐要存放在透風(fēng)良好的陰涼處，不要在太陽(yáng)光下暴曬。由于其制造精密及固有的特性，無(wú)論在使用或存放時(shí)，嚴(yán)禁液氮罐傾斜、橫放、顛倒、堆壓、相互撞擊或與其他物件碰撞，要始終保持罐體豎立。 ⑤用于長(zhǎng)期貯存時(shí)，則需要定期補(bǔ)充液氮，補(bǔ)充時(shí)一般應(yīng)在液氮剩余量為總?cè)萘康娜种粸橐恕?⑥放進(jìn)或取出冷凍物品時(shí)，要盡量使罐口打開(kāi)時(shí)間短，以減少液氮消耗，也不要把提筒完全提出來(lái)。 ⑦嚴(yán)禁在容器蓋上放置物體和密封頸口。 ⑧嚴(yán)禁用硬物清除頸管內(nèi)的凍霜，以免損傷頸管。 ⑨液氮罐只用于艷服液氮，不答應(yīng)艷服其他液體或混存。
　?、沁\(yùn)輸: ①運(yùn)輸時(shí)應(yīng)使用海棉或其它軟墊物品對(duì)液氮罐加以固定，預(yù)防翻倒。 ②正確選用運(yùn)輸罐(YDS-XB)，禁止使用貯存罐作運(yùn)輸罐用。

液氮罐在生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用
 
一、在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的使用
    細(xì)胞培養(yǎng)的一般過(guò)程，主要包括準(zhǔn)備、取材、培養(yǎng)和凍存復(fù)蘇4步。為保存細(xì)胞，特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株，要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般用一196℃液氮溫度，將細(xì)胞收集至凍存管中加入含保護(hù)劑(一般為二甲基亞砜或甘油)的培養(yǎng)基，以一定的冷卻速度凍存，最終保存于液氮中。在極低的溫度下，細(xì)胞保存的時(shí)間幾乎是無(wú)限的。
二、胚胎冷凍保存技術(shù)
    胚胎冷凍保存技術(shù)是指在低溫條件下利用低溫保護(hù)劑保存胚胎的一門技術(shù)。這一技術(shù)是20世紀(jì)后半葉隨著人工授精技術(shù)廣泛應(yīng)用而產(chǎn)生的，目前已成為了現(xiàn)代生命科學(xué)研究必備的手段之一。動(dòng)物胚胎的冷凍保存原理就是因?yàn)榈蜏亟档土伺咛?nèi)的變質(zhì)反應(yīng)速度，溫度越低，胚胎保存時(shí)間就越長(zhǎng)。
    目前已研究出多種胚胎冷凍保存方法，包括慢速冷凍法、快速冷凍法、一步冷凍法、直接移植冷凍法和玻璃化冷凍法等。其中玻璃化冷凍法的步驟如下：
    ①將胚胎在室溫下放人25％玻璃化溶液(VS液)中預(yù)處理15min；
    ②將預(yù)處理后的胚胎放在高濃度(75％一90％)的VS液中保存20—40min；
    ③將經(jīng)過(guò)兩步抗凍劑處理的胚胎直接投入液氮中保存。