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      今天是:2023年08月28日
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      基礎(chǔ)毒性研究的染毒途徑和方式

      基礎(chǔ)毒性研究,不論是急性、亞慢性與慢性毒性研究,主要是經(jīng)口、經(jīng)皮膚及經(jīng)呼吸道吸入及細(xì)胞暴露等四種染毒途徑。

      經(jīng)口染毒
      ① 灌胃 人工給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物灌入外源化學(xué)物是經(jīng)常使用的經(jīng)口染毒方法。此時(shí)外源化學(xué)物直接灌入胃內(nèi),而不與口腔及食道接觸,故而給予的化學(xué)物劑量準(zhǔn)確。但是,當(dāng)待測(cè)化學(xué)物為氣態(tài)或固體時(shí)均需用某種溶劑溶解,液態(tài)化學(xué)物往往也需用溶劑溶解。
      灌胃體積依所用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物而定,小鼠一次灌胃體積在0.1~0.5ml/kg體重,大鼠在1.0ml/100g體重之內(nèi),家兔在5ml/kg體重之內(nèi),狗不超過(guò)50ml/10kg體重。
      ② 喂飼 喂飼方法染毒是將化學(xué)物溶于無(wú)害的溶液中拌入飼料或飲用水中,使動(dòng)物自行攝入含化學(xué)物的飼料或水,然后依每日食入的飼料與水在推算動(dòng)物實(shí)際攝入化學(xué)物的劑量。
      喂飼法的優(yōu)點(diǎn)是接觸化學(xué)物的方式符合人類接觸污染食物與水的方式,方法簡(jiǎn)便、易操作。但是由于動(dòng)物(尤其是嚙齒類動(dòng)物)進(jìn)食時(shí)浪費(fèi)、損失飼料很多,往往攝入的化學(xué)物量不準(zhǔn)確,僅適用于動(dòng)物數(shù)量較大的毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)。如果化學(xué)物有異味,動(dòng)物可能拒食,如果化學(xué)物在室溫下可以揮發(fā),或在飼料中和水中可以水解,則劑量也不準(zhǔn)確,且有經(jīng)呼吸道與皮膚交叉吸收的可能,喂飼法為了計(jì)算每只動(dòng)物攝入化學(xué)物的劑量,一般要每只動(dòng)物單籠飼養(yǎng)。由于此種方法更適宜進(jìn)行多日染毒,急性毒性試驗(yàn)一般不用之。
      ③ 吞咽膠囊 將所需劑量的受試化學(xué)物裝入藥用膠囊內(nèi),強(qiáng)制放到動(dòng)物的舌后咽部迫使其咽下。此法劑量準(zhǔn)確,尤其適用于易揮發(fā)、易水解和有異臭的化學(xué)物。兔、貓及狗等較大動(dòng)物可用此法。

      經(jīng)呼吸道染毒
      凡是氣態(tài)或易揮發(fā)的液態(tài)化學(xué)物均有經(jīng)呼吸道吸入的可能,在生產(chǎn)過(guò)程中形成氣溶膠的化學(xué)物也可經(jīng)呼吸道吸入。經(jīng)呼吸道染毒有兩種類型,一是動(dòng)物自行吸收,一是人工動(dòng)物氣管注入。動(dòng)物自行吸入呼吸道染毒又分靜式吸入染毒與動(dòng)式吸入染毒兩種方法。
      靜式吸入染毒,即在一定容積的染毒柜內(nèi)加入一定量受試物造成含一定濃度受試物的空氣環(huán)境,使受試動(dòng)物在規(guī)定時(shí)間內(nèi), 經(jīng)吸入而達(dá)到染毒,故適用于短時(shí)間染毒的試驗(yàn)使用。
      動(dòng)式吸入染毒,即采用機(jī)械通風(fēng)為動(dòng)力,連續(xù)不斷地將含有已知濃度受試物的新鮮空氣送入染毒柜內(nèi),并排出等量的污染氣體,使染毒濃度保持相對(duì)穩(wěn)定,這樣可使染毒時(shí)間不受染毒柜(室)容積的限制,也可避免動(dòng)物缺氧、二氧化碳積聚、溫度增加等對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的可能影響,故適用于較長(zhǎng)時(shí)間以及反復(fù)染毒的試驗(yàn)使用。
      氣管注入,將液態(tài)或固態(tài)外源化學(xué)物注入肺內(nèi)。這是一個(gè)手術(shù)過(guò)程,僅適用于制造化學(xué)物對(duì)肺臟損傷模型的制備,而不用于一般毒性研究。

      經(jīng)皮膚染毒
      液態(tài)、氣態(tài)和粉塵狀外源化學(xué)物均有接觸皮膚的機(jī)會(huì)。外源化學(xué)物是否能經(jīng)皮膚吸收導(dǎo)致機(jī)體中毒或僅在皮膚局部引起損傷與外源化學(xué)物的性質(zhì)有關(guān)。能經(jīng)皮膚吸收的化學(xué)物主要以擴(kuò)散方式經(jīng)過(guò)皮膚角質(zhì)層屏障,在表皮角質(zhì)細(xì)胞的間質(zhì)中充滿非極性的脂類物質(zhì)。脂溶性化學(xué)物主要通過(guò)這種途徑滲透入皮膚,所以角質(zhì)層薄的皮膚部位更易吸收。表皮破損、皮膚水化或脫水,以及易于滯留于角質(zhì)層的化學(xué)物,均可增加化學(xué)物的滲透。所以,研究外源化學(xué)物的經(jīng)皮吸收時(shí),皮膚接觸化學(xué)物的面積、時(shí)間長(zhǎng)短、環(huán)境中溫、濕度均應(yīng)控制統(tǒng)一的條件。再者,年齡老的動(dòng)物表皮厚度改變、細(xì)胞成分也有變化,所以應(yīng)選擇成年動(dòng)物為宜。此外,為保證不因皮膚部位不同而形成的化學(xué)物滲透率差異,一般大鼠、豚鼠、兔均使用背部皮膚。面積則依據(jù)選用動(dòng)物及受試物的劑量和劑型而定。如,家兔可取5cm×6cm、豚鼠取3cm×4cm、大鼠取1.5cm~2.0cm直徑的面積,小鼠取1.0cm~1.5cm直徑的面積。實(shí)驗(yàn)前詳細(xì)檢查去毛部位皮膚有無(wú)擦傷、紅腫、皮疹等異?,F(xiàn)象,剔除不合格動(dòng)物。染毒時(shí)按單位體重確定給予所需毒劑的容量,故要求配置成相應(yīng)濃度的受試物。接觸時(shí)間應(yīng)與人實(shí)際接觸該物質(zhì)的時(shí)間相仿。但在做功能食品和藥物的毒理學(xué)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)時(shí),一般要求受試物接觸時(shí)間適當(dāng)延長(zhǎng),保證對(duì)人體不受危害。

      離體組織細(xì)胞染毒
      近年來(lái)隨著染毒裝置的改進(jìn),使得氣體毒性的體外研究成為可能,如CULTEX,使用transwell膜技術(shù),可使細(xì)胞直接暴露于各種氣體如香煙煙霧的環(huán)境中進(jìn)行染毒。細(xì)胞生長(zhǎng)在transwell膜上,染毒時(shí)膜基底面處于霧化的培養(yǎng)基中,細(xì)胞面暴露于染毒氣體,從而形成一種氣/液交界面,可模擬氣體進(jìn)入體內(nèi)的過(guò)程。能使細(xì)胞在常溫和有充分營(yíng)養(yǎng)的條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn),在控?zé)?、肺癌研究氣溶膠對(duì)健康影響領(lǐng)域是一個(gè)較好的研究工具。

      其它途徑染毒
      有時(shí)需對(duì)外源化學(xué)物進(jìn)行絕對(duì)毒性或比較毒性研究,或進(jìn)行一些必要的特殊研究(如靜脈注射毒物動(dòng)力學(xué)、代謝研究、急救藥物篩選等),往往用注射途徑染毒。注射途徑包括靜脈注射(大鼠、小鼠尾靜脈,兔耳緣靜脈)、肌肉注射、皮下注射及小動(dòng)物腹腔注射染毒。但注射時(shí)應(yīng)控制注射體積。